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磷酸钙细胞转染试剂盒操作方法

2024-06-21

磷酸钙细胞转染试剂盒的操作方法主要包括以下步骤:


1. 细胞准备:首先,使用胰蛋白酶消化培养细胞,并将对数生长期的细胞转移至新的培养皿中,待细胞密度达到7080%满时,即可进行转染。


2. DNA与试剂准备:取26μgDNA(体积不宜超过20μl),加入100μlCaCl2溶液(如2.5M CaCl2),混匀后形成DNA-CaCl2溶液。


3. 形成DNA-磷酸钙共沉淀物:取100μlBBS溶液(或类似的2X HEPES缓冲盐水),逐滴加入DNA-CaCl2溶液中,边加边轻轻搅拌。室温静置2030分钟,此时将形成DNA-磷酸钙共沉淀物。


4. 转染:将DNA-磷酸钙共沉淀物均匀加入到含有细胞的培养皿中,轻轻晃动使混合物均匀分布。


5. 培养与观察:将培养皿置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。根据细胞类型和实验需求,可以选择在转染后的一定时间(如68小时)更换培养基。


6. 后续实验:根据实验目的,可以在转染后的一定时间(如2448小时)进行后续实验,如基因表达检测、细胞功能分析等。


通过以上步骤,可以高效、准确地完成磷酸钙细胞转染实验。需要注意的是,实验操作时应严格遵循无菌操作规范,确保实验结果的准确性。