本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。

1.     裂解液的准备：

根据所需要提取的样本量，每500ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物和5ul蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。

2.     在4℃， 10000×g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。

2.       用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

3.       按每50-100mg湿重菌体样本加入500ul裂解液，吹打混匀，2-8℃振荡20-30分钟。

【注】：

l     使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

l     没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

4.       在150W-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。

【注】：

l     此步可以选做，没有超声条件的话可以不超声，延长上步骤振荡时间即可，至菌体充分裂解。

l     超声时间尽量短，提取液变清即可，一般不超过20分钟。

l     如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率过大，需要降低功率。

l     避免产生泡沫。

5.       在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。

6.       即得到细菌总蛋白样品。

7.       将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。